ebook Elementy enzymologii i biochemii białek Skrypt dla studentów biologii i biotechnologii Urszula Guzik, Danuta Wojcieszyńska

Spis treści ebooka Elementy enzymologii i biochemii białek

Spis treści

Przedmowa / 9
Wykaz stosowanych oznaczeń / 11
Zasady bezpieczeństwa i higieny pracy obowiązujące w Pracowni biochemii białek / 13

1. Izolacja i oczyszczanie enzymu / 15
1.1. Izolacja i wstępne oczyszczanie 1,2-dioksygenazy katecholowej / 15
1.1.1. WPROWADZENIE / 15
1.1.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 18
1.1.3. WYKONANIE / 19
1.1.3.1. Izolacja i wstępne oczyszczanie 1,2-dioksygenazy katecholowej szczepu Stenotrophomonas maltophilia KB2 / 19
1.1.3.2. Oznaczanie aktywności 1,2-dioksygenazy katecholowej / 21
1.1.3.3. Oznaczanie stężenia białka metodą Bradforda / 22
1.1.3.3.1. Przygotowanie krzywej wzorcowej / 22
1.1.3.3.2. Oznaczenie stężenia białka w badanym materiale biologicznym / 23
1.1.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 23
1.2. Wyznaczanie mas cząsteczkowych białek metodą sączenia żelowego oraz oczyszczanie białek metodą chromatografii jonowymiennej / 24
1.2.1. WPROWADZENIE / 24
1.2.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 25
1.2.3. WYKONANIE / 26
1.2.3.1. Wyznaczenie masy cząsteczkowej 1,2-dioksygenazy katecholowej metodą sączenia żelowego / 26
1.2.3.2. Oczyszczanie 1,2-dioksygenazy katecholowej metodą chromatografii jonowymiennej / 28
1.2.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 29
1.3. Elektroforeza dwuwymiarowa 2-DE białek / 30
1.3.1. WPROWADZENIE / 30
1.3.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 32
1.3.3. WYKONANIE / 32
1.3.3.1. Przygotowanie surowej frakcji enzymatycznej do elektroforezy 2-DE / 32
1.3.3.2. Przygotowanie krzywej wzorcowej do oznaczania stężenia białka metodą Bradforda w obecności buforu do przygotowywania próbek 2-DE / 33
1.3.3.3. Rehydratacja pasków IPG / 34
1.3.3.4. Izoogniskowanie białek z zastosowaniem pasków IPG / 34
1.3.3.5. Przygotowanie pasków do drugiego kierunku SDS-PAGE i rozdział elektroforetyczny / 35
1.3.3.6. Detekcja białek w żelu poliakrylamidowym metodą z Coomassie Brillant Blue / 36
1.3.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 36
1.4. Elektroforeza białek w żelu poliakrylamidowym w warunkach denaturujących / 36
1.4.1. WPROWADZENIE / 36
1.4.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 38
1.4.3. WYKONANIE / 38
1.4.3.1. Przygotowanie żelu poliakrylamidowego i rozdział białek / 38
1.4.3.2. Detekcja białek w żelu poliakrylamidowym metodą z Coomassie Brillant Blue oraz metodą srebrową / 39
1.4.4. OPRACOWANIE I DOKUMNETACJA WYNIKÓW / 40
1.5. Literatura / 40

2. Kinetyka reakcji enzymatycznej katalizowanej przez 1,2-dioksygenazę katecholową / 43
2.1. Wyznaczanie optymalnych warunków reakcji enzymatycznej / 43
2.1.1. WPROWADZENIE / 43
2.1.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 44
2.1.3. WYKONANIE / 45
2.1.3.1. Badanie wpływu temperatury na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 45
2.1.3.2. Badanie wpływu pH na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 46
2.1.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 47
2.2. Wyznaczanie stałych kinetycznych reakcji enzymatycznej / 48
2.2.1. WPROWADZENIE / 48
2.2.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 51
2.2.3. WYKONANIE / 52
2.2.3.1. Badanie wpływu stężenia substratu na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 52
2.2.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 53
2.3. Inhibicja reakcji enzymatycznych / 54
2.3.1. WPROWADZENIE / 54
2.3.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 55
2.3.3. WYKONANIE / 56
2.3.3.1. Badanie wpływu 2,4-dichlorofenolu na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 56
2.3.3.2. Badanie wpływu jonów niklu na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 57
2.3.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 58
2.4. Literatura / 59

3. Immobilizacja 1,2-dioksygenazy katecholowej / 61
3.1. Wpływ immobilizacji na aktywność 1,2-dioksygenazy katecholowej / 61
3.1.1. WPROWADZENIE / 61
3.1.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 62
3.1.3. WYKONANIE / 63
3.1.3.1. Immobilizacja 1,2-dioksygenazy katecholowej / 63
3.1.3.2. Oznaczanie stężenia białka w kulkach alginianowych / 63
3.1.3.2.1. Wyznaczenie krzywej kalibracyjnej dla oznaczania stężenia białka metodą Bradforda
w obecności KOH / 63
3.1.3.2.2. Oznaczanie stężenia białkach w kulkach alginianowych metodą Bradforda w obecności
KOH / 64
3.1.3.3. Oznaczanie aktywności immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej / 64
3.1.3.4. Wpływ czasu przechowywania na aktywność wolnego i immobilizowanego enzymu / 65
3.1.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 66
3.2. Badanie właściwości immobilizowanego enzymu / 67
3.2.1. WPROWADZENIE / 67
3.2.2. MATERIAŁY I ODCZYNNIKI / 68
3.2.3. WYKONANIE / 69
3.2.3.1. Badanie wpływu pH na aktywność wolnej i immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej / 69
3.2.3.2. Badanie wpływu temperatury na aktywność wolnej i immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej / 70
3.2.3.3. Badanie wpływu jonów metali oraz związków fenolowych na aktywność wolnej i immobilizowanej 1,2-dioksygenazy katecholowej / 71
3.2.3.4. Oznaczanie stężenia białka w surowej frakcji enzymatycznej i w kulkach alginianowych / 72
3.2.4. OPRACOWANIE I DOKUMENTACJA WYNIKÓW / 73
3.3. Literatura / 74

Szczegóły ebooka Elementy enzymologii i biochemii białek

Wydawca:

Wydawnictwo Uniwersytetu Śląskiego

Rok wydania:

2015

Typ publikacji:

Ebook

Język:

polski

Format:

pdf

ISBN:

978-83-8012-446-2

Wydanie:

1

Autorzy:

Urszula Guzik,Danuta Wojcieszyńska

Miejsce wydania:

Katowice

Liczba Stron:

78

Recenzje ebooka Elementy enzymologii i biochemii białek